在细菌质粒 pBPI的四环素抗性基因 tetR的中间有一个 HindⅡ的切点。用 Hind Ⅲ切割果蝇基因组 DNA,以 pBPl 为载体构建基因组文库。分子杂交证明克隆 15 带有果蝇的目的基因。用 Hind Ⅲ和 EcoRV对克隆 15 进行了酶切分析,电泳结果如图 15.1(用酶切的 pBPl质粒 DNA作对照),旁边标出了片段的大小。 如果用克隆在另一个与 pBPl完全不同源载体上的四环素抗性基因作为探针进行 Southern 印迹杂交,预测上述电泳图会出现什么样的杂交带?
在细菌质粒 pBPI的四环素抗性基因 tetR的中间有一个 HindⅡ的切点。用 Hind Ⅲ切割果蝇基因组 DNA,以 pBPl 为载体构建基因组文库。分子杂交证明克隆 15 带有果蝇的目的基因。用 Hind Ⅲ和 EcoRV对克隆 15 进行了酶切分析,电泳结果如图 15.1(用酶切的 pBPl质粒 DNA作对照),旁边标出了片段的大小。 绘制含有插入片段和不含插入片段时的 pBPl 的限制性图谱,并标明四环素抗性基因的位置;
某一质粒载体具有 Tetr和 Kanr的表型,在 Kan抗性基因内有一 Bgl I的切点。现用 Bgl I切割该载体进行基因克隆,问:(1)转化后涂皿时应加什么样的抗生素?(2)培养后长出的菌落具有什么样的抗性基因型?(3)如何利用抗性变化筛选到含有插入片段的重组体?
用一限制性内切核酸酶切割 Lac+Tetr的质粒载体,已知该酶识别的是4个碱基序列,并产生有两个碱基突出的单链末端,该酶在 lac 基因内有切割位点,并在第二个氨基酸密码子内,该位点可以被任何氨基酸所取代而不影响酶活性。用该酶切割后,用 DNA聚合酶将单链末端补齐为双链的平末端,然后重新连接成环,转化 Lac-Tets受体菌,筛选 Tet 转化子,问:Lacr的基因型是什么?并说明原因。